Tác dụng của Fucoidan đối với bệnh viêm gan C mãn tính 10/03/2014 – Đăng trong: Công dụng fucoidan – Thẻ: , ,

Trừu tượng

AIM: Để đánh giá ảnh hưởng của fucoidan, một chiết xuất polysaccharide sulfate phức tạp từ rong biển, trên virus viêm gan C (HCV) RNA tải cả in vitro và in vivo.

Phương pháp: HCV-1b tế bào Replicon-thể hiện được nuôi trong sự hiện diện của fucoidan lấy từCladosiphon okamuranus Tokida trồng ở Okinawa, Nhật Bản, và định lượng mức độ sao chép HCV.Trong một nghiên cứu không kiểm soát được mở, 15 bệnh nhân viêm gan C mãn tính, xơ gan và viêm gan C liên quan đến ung thư gan và được điều trị bằng fucoidan (0,83 g / ngày) trong 12 tháng. Các triệu chứng lâm sàng, xét nghiệm sinh hóa, và mức độ HCV RNA đã được đánh giá trước, trong và sau khi điều trị.

Kết quả: Fucoidan liều dependently ức chế sự biểu hiện của HCV Replicon. 8-10 tháng điều trị với Fucoidan, nồng độ HCV RNA thấp hơn đáng kể so với đường cơ sở. Điều trị tương tự cũng có xu hướng giảm mức alanine aminotransferase huyết thanh, và sau này có tương quan với nồng độ HCV RNA. Tuy nhiên, các xét nghiệm được cải thiện đã không biến thành cải thiện lâm sàng đáng kể. Fucoidan không có tác dụng phụ nghiêm trọng.

Kết luận: Các kết quả của chúng tôi cho thấy rằng fucoidan là an toàn và hữu ích trong việc điều trị các bệnh nhân bị bệnh gan mãn tính liên quan đến HCV. Thử nghiệm lâm sàng có kiểm soát hơn nữa là cần thiết để xác nhận những phát hiện hiện nay.

GIỚI THIỆU

Viêm gan siêu vi C (HCV) là bệnh viêm gan mãn tính thường dẫn đến sơ gan (LC) và ung thư gan biểu mô (HCC). Ước tính có đến 3,5 triệu người chẩn đoán mắc HCV hàng năm trên thế giới, và tiêu tốn hơn 170 triệu USD. Hiện khôn có thuốc để trị viêm gan C do sự biến đổi trình tự của hệ gen HCV. Việc trị liệu hiện nay bao gồm sự kết hợp của pegylated α-interferon (IFN) và ribavirin, một loại thuốc kháng virus phổ rộng. Mặc dù báo cáo cho thấy tỉ lệ xóa virus bằng liệu pháp này là 75-90%, nhưng thực tế thì kết quả không như mong đợi. Việc điều trị kháng virus thường gây tác dụng phụ, khó chịu và đôi khi không chịu nổi. Do đó, một phương pháp trị liệu không có tác dụng phụ luôn được trong đợi.

Trong thời gian xem xét từ 20-30 năm về sự phát triển của LC và HCC ở những người bị nhiễm HCV cho thấy tiến triển của bệnh có thể bị ảnh hưởng bởi tình trạng dinh dưỡng và chế độ ăn uống hàng ngày.

Fucoidan là một chuỗi hợp chất polysaccharide sulfate được chiết xuất từ tảo nâu có đặc tính khags viêm. Nhiều báo cáo cho thấy rằng, Fucoidan có thể ức chế sự sao chép của virus như virus herpes simplex, virus sindbis, virus làm suy giảm miễn dịch con người, virus cúm loại II, virus sốt xuất huyết. Theo báo cáo thì việc uống Fucoidan trong 12 tháng sẽ giảm được 42,4% các loại virus bệnh bạch cầu tế bào T của con người. Fucoidan không có độc tính, không gây dị ứng ở người, nó có thể sẽ rất hữu ích trong việc chống viêm gan C.

Trong nghiên cứu này, chúng tôi kiểm tra các hoạt động chống HCV của Fucoidan được chiết xuất từ tảo nâu Cladosipho Okamuranus Tokida trồng ở Okinawa. Đây là nghiên cứu lâm sang đầu tiên về ảnh hưởng của Fucoidan đối với bệnh nhân viên gan C mãn tính .

TÀI LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

Chuẩn bị của fucoidan từ rong biển

Các không ướp muối rong biển màu nâu C. okamuranus Tokida trồng ở Okinawa, Nhật Bản, đã bị đình chỉ trong nước, 0,57% (w / v) acid citric đã được thêm vào dung dịch, và sau đó gia nhiệt ở 90 ° C trong 40 phút. Việc đình chỉ được trung hòa với NaOH và làm lạnh đến 40°C. Nó được ly tâm ở 3500 g lắng ly tâm tách. Phần nổi được thu thập, sàng lọc sử dụng bộ lọc Cohlo, và tập trung bởi siêu lọc (phân tử trọng lượng cắt 6000). Các chất chiết xuất đã được sấy khô bằng spraydrier. Họ đã bao gồm carbohydrates (72%), acid uronic (24%), và sulfat (8%). Tổng carbohydrate được xác định bằng các phenol-H2SO4 phương pháp sử dụng fucose như là tiêu chuẩn. Acid uronic được xác định bằng các carbazole-H2SO4 phương pháp sử dụng axit D-glucuronic như là tiêu chuẩn. Nội dung sulfate được đo bằng sắc ký ion.Carbohydrate chính là fucose. Nội dung Fucoidan xác định bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao là 83% và trọng lượng phân tử là 21 kDa. Fucoidan được hòa tan trong đệm phosphat nước muối ở nồng độ 30 mg / ml.

Ức chế khảo nghiệm của các tế bào HCV Replicon của fucoidan

Fucoidan đã được thêm vào biến đổi trung bình Eagle của Dulbecco bổ sung 10% thai nhi huyết thanh bò của các tế bào HCV Replicon subgenomic FLR3-1 (kiểu gen Ib, Con-1 😉 ở nồng độ cuối cùng của 62.5, 125, 250, 500, 1000, 2000, và 3000 mg / ml. FLR3-1 tế bào đã được thành lập từ gan của con người Huh-7 tế bào bằng cách thâm chuyển ổn định với subgenomic RNA có thể lựa chọn trong đó các protein cấu trúc mã hóa HCV được thay thế bằng các gen luciferase đom đóm, chỗ đi vào ribosome nội bộ của virus Encephalomyocarditis, và gen neomycin phosphotransferase. Sau 72 giờ nuôi cấy, các tế bào được rửa trong phosphate đệm nước muối và ly giải phóng trong ly giải đệm (Promega, Madison, WI). Lysates được khảo nghiệm cho hoạt động luciferase với hệ thống luciferase khảo nghiệm (Promega) sử dụng các hướng dẫn được cung cấp bởi nhà sản xuất. Với subgenome HCV này, hiệu quả của biểu HCV subgenomic có thể được ước tính bằng cách đo hoạt động luciferase trong tế bào Replicon.

Đo khả năng di động

Khả năng di động được đo bằng cách sử dụng thuốc thử phát triển tế bào, WST-8 (Wako Hóa chất tinh khiết, Osaka, Nhật Bản). Phương pháp này dựa trên sự phân tách dehydrogenase ty thể của WST-8 để thuốc nhuộm formazan để ước tính mức độ khả năng di động. Một thời gian ngắn, FLR3-1 tế bào được ủ trong một tấm microculture 96 giếng. Sau 24 giờ ủ, fucoidan đã được thêm vào các tế bào ở nồng độ khác nhau. Sau 72 h văn hóa, WST-8 (5 ml) đã được thêm vào trong 4 h mới ủ và hấp thụ ở bước sóng 450 nm được đo bằng cách sử dụng một đầu đọc microplate tự động. WST-8 giải pháp đã được thêm vào các giếng phương tiện truyền thông chỉ để sửa chữa cho nền.

Bệnh nhân

Bảng 1 liệt kê các đặc điểm của bệnh nhân. Các đối tượng trong nghiên cứu này là 15 bệnh nhân bị bệnh gan mãn tính (7 người đàn ông và 8 phụ nữ, tuổi, 66,1 ± 11,1 năm; trung bình ± SD, phạm vi, 42-86), đã đến thăm Phòng khám y tế Nakasonekazu. Nghiên cứu này được thực hiện như một nghiên cứu mở. Tất cả các bệnh nhân bị nhiễm HCV genotype Ib, với tải lượng virus huyết thanh vượt quá 10 5 copies / mL.Chín bệnh nhân đã được chẩn đoán với trạm y tế xã, 4 với LC HCV liên quan đến, và 2 bị xơ gan liên quan đến HCV và HCC. Tám bệnh nhân không đủ điều kiện để điều trị IFN vì LC, biến chứng (trầm cảm), hoặc tuổi cao. Bảy bệnh nhân đã được điều trị IFN trong quá khứ. Sáu bệnh nhân không đáp ứng với IFN và 1 điều trị ngưng vì tác dụng phụ (trầm cảm). Tất cả bệnh nhân đánh giá khả năng dung nạp là tuyệt vời.

Đặc điểm của bệnh nhân

Trong khi điều trị fucoidan, 11 bệnh nhân nhận được một sự chuẩn bị glycyrrhizin. Fucoidan (được cung cấp bởi Kanehide Bio Co, Okinawa, Nhật Bản) đã được đưa ra bằng miệng như viên nang chứa 166 mg chiết xuất khô từ C. okamuranus Tokida mỗi viên nang trong một liều năm viên mỗi ngày cho 12 tháng.Sự đồng ý được thu thập từ tất cả các bệnh nhân tham gia nghiên cứu, sau khi một lời giải thích thấu đáo về mục tiêu, rủi ro và lợi ích của liệu pháp này.

Thông số thử nghiệm

Các thông số kết quả bao gồm quá trình alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), mức HCV RNA định lượng, các triệu chứng chủ quan kết hợp với trạm y tế xã, LC, và HCC (như mệt mỏi, khó chịu ở bụng, trầm cảm, và khó tiêu), an toàn, và tuân thủ. Dữ liệu trên tất cả các thông số lâm sàng đã được ghi lại mỗi khi truy cập. Mức HCV RNA đã được xác định bằng cách sử dụng thử nghiệm Amplicor GT HCV Monitor (Roche Diagnostics, Basel, Thụy Sĩ), trong đó có một giới hạn thấp hơn định lượng 0,5 Kiu / mL ở một phạm vi tuyến tính lên đến 850 Kiu / ml.

Phân tích thống kê

Dữ liệu được thể hiện dưới dạng trung bình ± SD. Kết quả xét nghiệm sinh hóa và nồng độ HCV RNA được so sánh bằng t kiểm tra của sinh viên. Một P <0,05 được coi là đáng kể.

KẾT QUẢ

Fucoidan ngăn chặn sao chép HCV

Đánh giá hiệu quả của fucoidan trên sao chép tế bào của bộ gen HCV, HCV tế bào Replicon subgenomic FLR3-1 được nuôi trong sự hiện diện của nồng độ khác nhau của fucoidan trong môi trường. Các hoạt động của các tế bào luciferase FLR3-1 cho thấy một sự đàn áp phụ thuộc nồng độ sao chép của HCV Replicon của Fucoidan. Các WST-8 thử nghiệm cho thấy Fucoidan có tác dụng không đáng kể về khả năng tồn tại tế bào. Những kết quả này cho thấy rằng Fucoidan ức chế sự sao chép HCV nhưng không có tác dụng gây độc tế bào.

Hiệu ứng chống viêm gan siêu vi C của fucoidan trong các tế bào Replicon virus viêm gan C. Luciferase (LUC) hoạt động (một dấu hiệu của mức độ sao chép) và khả năng di động của FLR3-1 tế bào, mà constitutively nhanh virus viêm gan C Replicon, được đo lường trong …

Hiệu quả điều trị fucoidan trên HCV RNA và mức alanine aminotransferase

Thay đổi HCV RNA và mức ALT huyết thanh ở những bệnh nhân được điều trị bằng fucoidan được thể hiện trong hình Figure2.2 . Các nghĩa HCV RNA trong 15 bệnh nhân là 736 ± 118 Kiu/ml (khoảng 100-850 Kiu/mL) trước khi điều trị Fucoidan. Như thể hiện trong hình Figure2A,2A ,Fucoidan có xu hướng giảm mức độ trung bình RNA HCV với thời gian liên quan đến đường cơ sở, với sự giảm đáng kể đăng ký tại 8-10 tháng điều trị. Tuy nhiên, HCV RNA tăng lên sau khi 11 và 12 tháng. Xét nghiệm sinh hóa cho thấy rằng mức độ trung bình ALT huyết thanh, nhưng không AST, tương quan với mức độ HCV RNA có nghĩa là, mặc dù giảm mức ALT không có ý nghĩa so với ban đầu (Hình (Figure2B).2B ). Trong khi đó, những thay đổi trên không liên quan đến cải thiện các triệu chứng lâm sàng ở mỗi bệnh nhân, không ai trong số các bệnh nhân cho thấy sự tiến triển của sự kiện LC hoặc có hại.

Ảnh hưởng của điều trị bằng fucoidan trên virus viêm gan C RNA và mức alanine aminotransferase ở bệnh nhân có bệnh gan. A: vi-rút viêm gan C (HCV) RNA; B: Serum alanine aminotransferase (ALT) cấp. Giá trị trung bình là ± SD. B P <…

THẢO LUẬN

Người ta ước tính rằng 170 triệu người trên toàn thế giới bị nhiễm HCV, và khoảng 2 triệu (1%) của các cư trú tại Nhật Bản. Trong các trường hợp HCC ở Nhật Bản, khoảng 80% là do nhiễm HCV. Sự gia tăng số lượng bệnh nhân HCC góp phần vào sự gia tăng số người chết tại Nhật Bản từ HCC. Xu hướng này dự kiến sẽ tiếp tục cho đến năm 2015. Các chiến lược chung sau trong điều trị trạm y tế xã bao gồm xóa HCV và ức chế viêm gan.

Polysaccharides sunfat bao gồm fucoidan được báo cáo để ức chế sự phát triển của virus bao bọc khác nhau. Fucoidan được cho là ức chế vi rút hấp phụ lên bề mặt tế bào bằng cách gắn vào bề mặt tế bào, phòng ngừa tiếp theo của nhiễm trùng tế bào. Ngoài ra, fucoidan tương tác trực tiếp với các phong bì glycoprotein trên virus sốt xuất huyết loại II. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã chứng minh một cơ chế mới của hành động cho Fucoidan. Sử dụng hệ thống HCV Replicon, chúng tôi đã chứng minh ở đây là Fucoidan ức chế sự sao chép tế bào của bộ gen HCV trong ống nghiệm.

Theo chúng tôi biết, đây là nghiên cứu lâm sàng đầu tiên để điều tra tác động của Fucoidan ở bệnh nhân có bệnh gan. Lý do nghiên cứu này đã được kích thích bởi dữ liệu thực nghiệm cho thấy hiệu quả của fucoidan trong nuôi cấy tế bào. Bệnh nhân bị nhiễm HCV mãn tính, những người không đủ điều kiện, không trả lời, hoặc là không dung nạp điều trị IFN, đã được điều trị 12 tháng với fucoidan 830 mg / ngày để điều tra tác động của điều trị này trên mức HCV RNA. Trong trường hợp 6 (cơ sở HCV RNA 380 Kiu / mL), điều trị Fucoidan tiêu diệt thành công HCV tại 9 tháng, mặc dù HCV RNA là 5 Kiu / ml ở 10 tháng. Do đó, Fucoidan có hiệu quả trong việc giảm mức độ HCV RNA trong nghiên cứu này, mặc dù hiệu quả của nó chỉ là tạm thời. Có một giảm đáng kể HCV RNA vào tháng 8, 9 và 10 bắt fucoidan (P<0,01). Tuy nhiên, mức tăng sau vào tháng 12 để trở thành tương đương với cơ sở.

Chúng tôi cũng đo mức độ IFNα huyết thanh để xác định tác động gián tiếp của fucoidan trên IFNs, đặc biệt là cho dù nó làm tăng hoạt tính kháng virus của IFNs. Tuy nhiên, IFNα có thể không được phát hiện trong huyết thanh của bệnh nhân điều trị với Fucoidan. Hơn nữa, Fucoidan đã không tăng cường biểu hiện IFNs trong FLR3-1 tế bào Replicon (dữ liệu không hiển thị). Nó đã được báo cáo rằng tác dụng bảo vệ của fucoidan được dựa trên sự ức chế trực tiếp của nhân lên của virus và sự kích thích của cả hai chức năng bảo vệ miễn dịch bẩm sinh và thích nghi. Chúng tôi hiện đang điều tra ảnh hưởng của fucoidan trên hệ miễn dịch bao gồm cả giết tự nhiên hoạt động tế bào gây độc tế bào.

Nghiên cứu của chúng tôi có những hạn chế nhất định. Đầu tiên, nghiên cứu bao gồm chỉ một số ít bệnh nhân, trong đó có 6 bệnh nhân đã được biết đến không đáp ứng với điều trị IFN. Thứ hai, tất cả các bệnh nhân nuôi dưỡng vi-rút HCV genotype Ib và 6 có xơ gan. Như vậy, ít nhất là một số bệnh nhân trong nhóm này có thể được phân loại như khả năng không đáp ứng với điều trị IFN. Như vậy, tiêu chí lựa chọn sử dụng trong nghiên cứu này có thể ủng hộ một đáp ứng kém với Fucoidan.

Mức độ cao bất thường của ALT có xu hướng giảm tạm thời trong khi điều trị fucoidan, cho thấy một mối tương quan giữa tải lượng virus và chỉ số rối loạn chức năng gan. Do đó, Fucoidan có thể có hiệu quả trong việc quản lý bệnh gan mãn tính liên quan đến HCV, mặc dù cải thiện lâm sàng lâu dài không được quan sát trong nghiên cứu này. Quan trọng hơn, không có tác dụng phụ được ghi nhận ở tất cả các bệnh nhân, tương tự như kết quả được báo cáo trong một nghiên cứu trước đây trên fucoidan, cho thấy rằng uống hàng ngày của fucoidan cho 12 tháng là an toàn và chấp nhận được.

Không có nghi ngờ rằng những bệnh nhân không đáp ứng với điều trị thông thường thường tìm kiếm phương pháp điều trị thay thế. Tóm lại, nghiên cứu của chúng tôi chứng minh rằng fucoidan từ C.okamuranus Tokida có HCV nhân rộng hiệu ứng ức chế trong một hệ thống di động Replicon. Hơn nữa, nghiên cứu thí điểm không kiểm soát được tương đối nhỏ của chúng tôi cho thấy Fucoidan có tác dụng tạm thời nhưng có lợi về mức độ HCV RNA ở những bệnh nhân nhiễm HCV. Kết quả sơ bộ cho thấy rằng fucoidan có thể là một phụ gia thực phẩm sức khỏe hữu ích với hoạt tính kháng virus được sử dụng trong điều trị các bệnh gan mãn tính. Để ngăn chặn các hiệu giá virus càng nhiều và càng lâu càng tốt, chúng ta cần phải xác định liều lượng hiệu quả hàng ngày. Nghiên cứu sâu hơn về cơ chế ức chế HCV fucoidan gây ra có thể cung cấp các chiến lược thay thế cho việc thiết kế các loại thuốc chống viêm gan C mới.

LỜI CẢM TẠ

Chúng tôi cảm ơn Tiến sĩ Michinori Kohara cung cấp tế bào HCV Replicon và hỗ trợ kỹ thuật. Chúng tôi rất biết ơn Kanehide Bio Công ty TNHH, cung cấp Fucoidan.

GÓP Ý

Cơ bản

Vi-rút viêm gan C (HCV) là một nguyên nhân chính gây bệnh gan mãn tính như viêm gan mạn tính, xơ gan và ung thư biểu mô tế bào gan. Chăm sóc tiêu chuẩn cho bệnh viêm gan C mãn tính liên quan đến việc quản lý của pegylated interferon α-kết hợp với ribavirin nucleotide tương tự. Tuy nhiên, chế độ này đã hạn chế tỷ lệ thành công cho kiểu gen I và IV, và tác dụng phụ bất lợi. Vì vậy, điều quan trọng là để khám phá đại lý hiệu quả hơn và an toàn hơn để cải thiện việc điều trị lâm sàng trên các tàu sân bay HCV. Fucoidan, một polysaccharide sulfate, có hoạt tính sinh học đáng kể, chẳng hạn như kháng virus và tác dụng chống viêm. Tuy nhiên, đã có không có điều tra về hiệu quả của Fucoidan chống lại bệnh viêm gan C

Biên giới nghiên cứu

Sản phẩm tự nhiên đã được sử dụng để điều trị các bệnh khác nhau để thay thế cho các chất hóa học thông thường. Cho đến nay, một số sản phẩm tự nhiên đã được sàng lọc cho tác dụng kháng virus của họ chống lại nhiễm virus khác nhau. Sàng lọc các chất ức chế mạnh tự nhiên cho HCV cũng đã trở thành một điểm nóng nghiên cứu.

Đổi mới và đột phá

Nghiên cứu trước đây đã cho thấy hiệu quả của sản phẩm tự nhiên chống lại nhân rộng HCV trong một hệ thống Replicon HCV di động dựa trên. Tuy nhiên, có rất ít nghiên cứu lâm sàng đánh giá sự an toàn và hiệu quả của các sản phẩm tự nhiên. Trong nghiên cứu này, các tác giả đã nghiên cứu hoạt động chống HCV của fucoidan lấy từ Cladosiphon okamuranus Tokida trồng ở Okinawa, Nhật Bản, cả in vitro vàin vivo. Nghiên cứu thí điểm này là thử nghiệm lâm sàng đầu tiên về ảnh hưởng của fucoidan ở bệnh nhân có bệnh gan mãn tính liên quan đến HCV.

Ứng dụng

Fucoidan ức chế HCV RNA nhân rộng trong hệ thống xét nghiệm HCV Replicon. Các dữ liệu thực nghiệm về hiệu quả fucoidan trong nuôi cấy tế bào kích thích lý do cho nghiên cứu lâm sàng. Quản lý fucoidan miệng dẫn đến giảm tạm thời của tải lượng virus kiểu gen Ib ở những bệnh nhân bị nhiễm HCV mãn tính, những người không đủ điều kiện, không trả lời, hoặc là không dung nạp điều trị interferon. Fucoidan được dung nạp tốt và không có tác dụng phụ nghiêm trọng đã được quan sát thấy ở bất kỳ bệnh nhân. Fucoidan trưng bày kháng virus chống lại HCV cả in vitro và in vivo, và sẽ được dự kiến sẽ trở thành một chiến lược mới cho bệnh viêm gan C. Thử nghiệm lâm sàng có kiểm soát hơn nữa sẽ được yêu cầu xác nhận các kết quả hiện tại.

Thuật ngữ

Fucoidan là một polysaccharide sulfate phức tạp tìm thấy trong các tế bào của nhiều tảo nâu ăn, bao gồm cả Fucus vesiculosus. Hệ thống HCV Replicon sao chép bộ gen HCV sửa đổi có chứa gen luciferase ở mức cao trong các tế bào gan của con người. Hiệu quả của biểu HCV subgenomic được ước tính bằng cách đo hoạt động luciferase trong tế bào Replicon. Hệ thống này cung cấp một công cụ mạnh để nghiên cứu sao chép của virus và sàng lọc các thuốc kháng HCV.

Đánh giá ngang hàng

Giấy các nghiên cứu tác dụng của Fucoidan, một polysaccharide sulfate phức tạp chiết xuất từ rong biển, trên HCV RNA tải in vitro và in vivo. Nghiên cứu có ý nghĩa vì tỷ lệ cao không đáp ứng trong HCV genotype tôi, đó là sự căng thẳng chiếm ưu thế tại Nhật Bản. Hơn nữa, điều trị kháng virus gây ra tác dụng phụ thường xuyên, khó chịu và đôi khi nghiêm trọng, Vì vậy việc tìm kiếm một phương thức điều trị mới mà không có tác dụng phụ nghiêm trọng là mong muốn.

By hoai giang

« Ung thư vú di căn có loại ?
Fucoidan chữa ung thư gan »